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[一]保留時間變化
1.柱溫變化 柱恒溫，必要時需配置恒溫箱
2.等度與梯度間未能充分平衡 至少用10倍柱體積的流動相平衡柱
3.緩沖液容量不夠 用25mmol/L的緩沖液
4.柱污染 每天沖洗柱
5.柱內條件變化 穩(wěn)定進樣條件,調節(jié)流動相
6.柱快達到壽命 采用保護柱
[二]保留時間縮短
1.流速增加 檢查泵,重新設定流速
2.樣品超載 降低樣品量
3.鍵合相流失 流動相PH值保持在3~7.5檢查柱的方向
4.流動相組成變化 防止流動相蒸發(fā)或沉淀
5.溫度增加 柱恒溫
[三]保留時間延長
1.流速下降 管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內氣泡
2.硅膠柱上活性點變化 用流動相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱
3.鍵合相流失 同前[二]3
4.流動相組成變化 同前[二]4
5.溫度降低 同前[二]5
[四] 出現肩峰或分*
1.樣品體積過大 用流動相配樣,總的樣品體積小于*峰的15%
2.樣品溶劑過強 采用較弱的樣品溶劑
3.柱塌陷或形成短路通道 更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件
4.柱內燒結不銹鋼失效 更換燒結不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品
5.進樣器損壞 更換進樣器轉子
[五]鬼峰
1.進樣閥殘余峰 每次用后用強溶劑清洗閥,改進閥和樣品的清洗
2.樣品中未知物 處理樣品
3.柱未平衡 重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑 [尤其是離子對色譜]
4.三fu乙酸[TFA]氧化[肽譜] 每天新配,用抗氧化劑
5.水污染[反相] 通過變化平衡時間檢查水質量，用HPLC級的水
[六] 基線噪聲
1.氣泡[尖銳峰] 流動相脫氣,加柱后背壓
2.污染[隨機噪聲] 清洗柱,凈化樣品,用HPLC級試劑
3.檢測器燈連續(xù)噪聲 更換氘燈
4.電干擾[偶然噪聲] 采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來源[如水浴等]
5.檢測器中有氣泡 流動相脫氣,加柱后背壓
[七]峰拖尾
1.柱超載 降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相
2.峰干擾 清潔樣品,調整流動相
3.硅羥基作用 加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相PH值,鈍化樣品
4.同前[四]4 同前[四]4
5.同前[四]3 5.同前[四]3
6.死體積或柱外體積過大 連接點降至zui低,對所有連接點作合適調整,盡可能采用細內徑的連接管
7.柱效下降 用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護柱
[八]峰展寬
1.進樣體積過大 同[四]1
2.在進樣閥中造成峰擴展 進樣前后排出氣泡以降低擴散
3.數據系統采樣速率太慢 設定速率應是每峰大于10點
4.檢測器時間常數過大 設定時間常數為感興趣*峰半寬的10%
5.流動相粘度過高 增加柱溫,采用低粘度流動相
6.檢測池體積過大 用小體積池,卸下熱交換器
7.保留時間過長 等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫
8.柱外體積過大 將連接管徑和連接管長度降至zui小
9.樣品過載 進小濃度小體積樣品
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