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HPLC儀器的日常維護(hù)與保養(yǎng)
一套HPLC系統(tǒng)大致分為以下幾個部分：流動相前處理部分、輸液部分、進(jìn)樣部分、分離部分、檢測部分。下面將分兩期介紹各部分的使用方法和注意事項。*期先介紹流動相前處理部分和輸液部分。
一、流動相前處理
流動相前處理主要包括過濾和脫氣，使用設(shè)備主要為溶劑過濾器、真空泵和超聲波。
1、過濾。HPLC所用流動相必須預(yù)先過濾和脫氣，過濾的作用是防止顆粒性的雜質(zhì)堵塞系統(tǒng)，或影響單向閥的正常工作。過濾時需要注意濾膜的選擇，油膜和水系膜必須分開使用。水膜易有機(jī)溶劑溶解而進(jìn)入系統(tǒng)導(dǎo)致泵流路和色譜柱頭的堵塞。
2、超聲。超聲的作用是去除流動相中的氣泡。超聲時間一般在20min即可。超聲后，液體溫度會升高，應(yīng)冷卻到室溫再使用。超聲后的流動相若需隔天使用再次超聲。
二、輸液系統(tǒng)
輸液系統(tǒng)即是指高壓恒流泵，其作用是能提供穩(wěn)定準(zhǔn)確的流速。泵的維護(hù)主要分為以下三個部分。
1、溶劑過濾頭。吸液過濾頭，或稱沉子，主要作用是過濾流動相中可能存在的顆粒性雜質(zhì)。長時間使用后，雜質(zhì)有可能阻塞溶劑過濾頭上的過濾板孔隙；或長時間使用緩沖液，過濾頭表面容易產(chǎn)生一層膜，阻礙流動相正常通過。嚴(yán)重時，即使是已超聲過的溶劑，泵吸液時也會有氣泡在四氟輸液管里產(chǎn)生，因此應(yīng)經(jīng)常對過濾頭進(jìn)行清洗。清洗溶劑可以選擇乙醇或者30%稀硝酸溶液，正相系統(tǒng)需注意濾頭的烘干處理。
2、單向閥。單向閥的作用是確保液體向一個方向流動，是高壓恒流泵穩(wěn)定輸液的保證。日常使用過程中，可以通過觀察壓力的情況，初步判斷流量是否正常。如果系統(tǒng)已經(jīng)平衡一段時間，壓力應(yīng)該是穩(wěn)定的。但如果壓力存在波動，則表明流量不穩(wěn)定；如果無壓力，則表明無流量。這兩種情況大多是因為單向閥里混入了氣泡或雜質(zhì)。混入氣泡的情況，應(yīng)把放空閥打開，按沖洗鍵將里面的氣泡排出。單向閥混入雜質(zhì)的情況，須對其進(jìn)行清洗。清洗溶劑可以選擇乙醇，安裝時注意標(biāo)記環(huán)的方向。
單向閥裝配圖及剖面圖
1 帶標(biāo)記環(huán)閥外套；2 陶瓷座；3 寶石球；4 帶密封墊限位套；5 密封墊
3、密封圈。密封圈是固定在柱塞桿上防止泵腔內(nèi)的液體泄漏，是保證泵頭輸液正常的關(guān)鍵部件。但柱塞桿和柱塞密封圈長期使用會發(fā)生磨損，主要與流量、操作壓力和所使用的流動相有關(guān)。當(dāng)使用含鹽的流動相時，由于脫水或蒸發(fā)，可能形成鹽結(jié)晶，而泵運動時鹽結(jié)晶會導(dǎo)致密封圈和柱塞桿的磨損。因此，每天實驗前和實驗后都需用純水沖洗一次密封圈（在柱塞密封圈和二級密封圈之間），保持清洗管內(nèi)有水以防止形成晶體，延長柱塞桿和密封圈的使用壽命。
等度系統(tǒng) 梯度系統(tǒng)
柱塞桿清洗連接示意圖
4、在線過濾器。為了防止由于流動相雜質(zhì)微粒進(jìn)入色譜系統(tǒng)，泵在放空閥內(nèi)安裝了在線過濾器，經(jīng)泵出口流出的液體通過在線過濾器，經(jīng)排空管流出的液體不通過在線過濾器。儀器使用一定時間后，建議用戶清洗在線過濾器的燒結(jié)不銹鋼過濾片。用扳手卸下壓帽，將密封環(huán)和燒結(jié)不銹鋼過濾片一同取出清洗，清洗后按原位裝上。清洗溶劑可以選擇30%稀硝酸溶液，正相系統(tǒng)需注意濾頭的烘干處理。
在線過濾裝置示意圖
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