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1.液相系統(tǒng)沒有平衡好,柱子里的流動(dòng)相一直在變化,在檢測(cè)器里面的吸收就會(huì)一直變化,導(dǎo)致基線波動(dòng)的發(fā)生;梯度時(shí)如果其實(shí)比例的流動(dòng)相平衡時(shí)間過短也會(huì)造成基線波動(dòng);
2.實(shí)驗(yàn)室環(huán)境不穩(wěn)定(比如溫度忽高忽低,氣流不斷變化等),這對(duì)于沒有柱溫箱或只有單向溫度變化的HPLC儀器的影響尤其明顯;即使有比較好的柱溫箱時(shí),也要注意別讓空調(diào)的出風(fēng)口一直對(duì)照儀器吹,那樣基線也可能會(huì)波動(dòng);此外實(shí)驗(yàn)室有電磁干擾時(shí),也有可能會(huì)導(dǎo)致此問題的發(fā)生;
3.檢測(cè)器的流通池被污染,造成吸收的不恒定,此時(shí)需要清洗流通池;
4.檢測(cè)器燈能量不足時(shí),吸收會(huì)變得不穩(wěn)定,這時(shí)基線一般也不穩(wěn)定,特別是在低波長(zhǎng)處尤為明顯;
5.當(dāng)使用低波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),有時(shí)流動(dòng)相會(huì)使用兩相或以上的等度,這時(shí)混合器的很小的混合比例的誤差都會(huì)被放大,很有可能會(huì)使基線發(fā)生波動(dòng),這時(shí)將流動(dòng)相按比例混合到一個(gè)通道里時(shí),一般都會(huì)使情況改善很多;
6.流動(dòng)相里的有機(jī)相的截止波長(zhǎng)要大于檢測(cè)波長(zhǎng)20nm以上,這一點(diǎn)切記,比如甲醇的截止波長(zhǎng)是210nm,乙腈是190nm。當(dāng)使用230nm以下的檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí),如果條件允許,使用乙腈,可以避免基線波動(dòng),其余類推;
7.儀器出現(xiàn)問題也會(huì)造成基線波動(dòng),比如(1)流動(dòng)相過濾頭堵塞、入口主動(dòng)閥濾芯污染、單向閥被污染物堵塞、泵頭有氣泡、比例閥出故障、系統(tǒng)流路漏液,比如管路裂開、peek接頭沒*連上色譜柱而導(dǎo)致的泄露等;
8.沒有脫氣機(jī)的儀器,當(dāng)流動(dòng)相未脫氣或脫氣未*時(shí),基線也會(huì)波動(dòng);有脫氣機(jī)的每次使用前都要檢查一下是否正常工作;
9.當(dāng)大家使用梯度作為組分洗脫方式的時(shí)候,有條件的使用超純水,磷酸鹽、三乙胺等固體液體加入試劑也使用HPLC級(jí)別的,因?yàn)樵谔荻戎须S著有機(jī)相(洗脫力較強(qiáng))的不斷增加,流動(dòng)相系統(tǒng)里的雜質(zhì)會(huì)在基線上反映出來,導(dǎo)致出現(xiàn)鬼峰或基線波動(dòng);
10.流動(dòng)相中的有機(jī)相和緩沖液的比例一定要注意調(diào)配好,緩沖液的比例不能過大,要不然會(huì)出現(xiàn)緩沖鹽在柱子里析出的情況,這樣不但會(huì)造成基線波動(dòng)的發(fā)生,甚至?xí)斐缮V柱毀壞;
11.當(dāng)色譜柱被污染時(shí),也會(huì)造成基線波動(dòng),這里尤其要注意的是大家在做合成中控實(shí)驗(yàn)的時(shí)候,不要用合成的原始反應(yīng)液直接進(jìn)樣,因?yàn)樵豪锩嬗泻芏喾菢O性或極性很小的化合物,一旦進(jìn)入到反相色譜柱里和非極性的C18發(fā)生相互作用,很可能就洗脫不下來使色譜柱變性或者慢慢的被洗脫下來,造成以后的分析出現(xiàn)不穩(wěn)定的鬼峰或者基線波動(dòng);
12.一些比較老的液相儀對(duì)電壓要求很高,電壓有點(diǎn)起伏檢測(cè)器就會(huì)反映教明顯,比如老的惠普和島津等儀器,這時(shí)需要配一個(gè)穩(wěn)壓電源來解決此問題;此外儀器和電腦之間連接的數(shù)據(jù)線出問題或老化也可能會(huì)使基線波動(dòng)。