薄層掃描儀是對(duì)薄層色譜進(jìn)行定量檢測(cè)分析的儀器,當(dāng)前市場(chǎng)上有兩類薄層色譜掃描儀:
傳統(tǒng)掃描儀
是一種全波長(zhǎng)掃描儀,提供波長(zhǎng)200-800nm范圍的可選波長(zhǎng),通過(guò)檢測(cè)樣品對(duì)光的吸收強(qiáng)弱確定物質(zhì)含量。該掃描儀也能檢測(cè)254nm或365nm紫外照射產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度,從而進(jìn)行特異性檢測(cè)。
傳統(tǒng)掃描儀的掃描方式分為:?jiǎn)喂馐鴴呙?、雙光束掃描和雙波長(zhǎng)掃描。
單光束掃描:采用單一光束(即單一波長(zhǎng)掃描),其結(jié)果就是上圖中一特定波長(zhǎng)條件下的單條曲線。儀器結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,但是基線不穩(wěn),實(shí)際中很少使用。
雙光束掃描:采用同一波長(zhǎng)的兩個(gè)光束同步掃描,一個(gè)光束掃描樣品展開通道,另一個(gè)光束掃描樣品通道旁邊的空白區(qū)域,這樣就可扣除空白吸收,部分消除薄層板展開方向鋪板不均勻產(chǎn)生的誤差。但是無(wú)法消除垂至于展開方向鋪板不均勻產(chǎn)生的誤差。
雙波長(zhǎng)掃描:兩個(gè)不同波長(zhǎng)的光束交替掃描樣品展開的通道區(qū)域,波長(zhǎng)選擇時(shí),一個(gè)波長(zhǎng)為樣品大吸收位置,另一是吸收極小值位置。如上圖所示,如檢測(cè)目標(biāo)為3(則大吸收峰為290nm,極小值可選200nm、260nm或325nm)。這種方法可基本消除鋪板不均產(chǎn)生的誤差,因此掃描基線很穩(wěn)定。
以上各種掃描方式中,根據(jù)光源大?。⊕呙杈龋┎煌煞譃橹本€掃描和鋸齒掃描。
直線掃描:用可以覆蓋樣品展開通道的寬光束一次性掃完整個(gè)展開通道,即在展開方向上(圖中橫坐標(biāo)),每個(gè)點(diǎn)的數(shù)據(jù)只是一個(gè)掃描數(shù)據(jù)點(diǎn)。
鋸齒掃描:采用點(diǎn)狀光源,光點(diǎn)尺寸小于通道寬度,因此在展開方向移動(dòng)到任何一點(diǎn)時(shí),光源都要逐點(diǎn)沿樣品通道方向掃描,即形成“之”形(或鋸齒形掃描)。這樣,在展開方向上每一點(diǎn)的數(shù)據(jù)都是多個(gè)點(diǎn)掃描結(jié)果的累加值。鋸齒掃描的精度相對(duì)直線掃描明顯提高。
當(dāng)前,在定量分析中,薄層掃描多采用雙波長(zhǎng)鋸齒掃描。
分析誤差
薄層分析的誤差包括三個(gè)方面:點(diǎn)樣誤差、展開誤差、定位誤差和檢測(cè)誤差。
采用自動(dòng)點(diǎn)樣器,誤差可控制在0.5%,熟練的分析人員用毛細(xì)管點(diǎn)樣,誤差小于1.0%,若用微量進(jìn)樣器,誤差會(huì)大一些。
展開誤差來(lái)自鋪板的均勻性和樣品展開效果,若采用預(yù)制的薄層板,誤差會(huì)明顯降低,采用雙波長(zhǎng)鋸齒掃描,也能有效降低展開誤差。
定位誤差值斑點(diǎn)的位置和大小判定,擴(kuò)散、脫尾等易產(chǎn)生定位誤差。檢測(cè)誤差來(lái)自光源的穩(wěn)定性、光檢測(cè)器的穩(wěn)定性以及樣品對(duì)光吸收(或熒光產(chǎn)生)的線性度等方面。為減少這些誤差,需要非常精密的機(jī)電系統(tǒng),這也直接導(dǎo)致產(chǎn)品高昂的價(jià)格。
通常情況下,薄層掃描分析的誤差在3%以下。
薄層數(shù)碼成像分析儀
薄層數(shù)碼成像分析技術(shù)是利用數(shù)碼成像設(shè)備獲得薄層板上各點(diǎn)的光強(qiáng)度信息,之后對(duì)獲得圖像進(jìn)行分析的薄層分析技術(shù)。數(shù)碼成像設(shè)備包括兩種:照相機(jī)和掃描儀(由于數(shù)碼掃描儀采用逐行成像技術(shù),為便于區(qū)分傳統(tǒng)薄層掃描儀的逐點(diǎn)掃描,將數(shù)碼掃描儀稱為逐行掃描儀)。
和傳統(tǒng)薄層掃描一樣,照相機(jī)或逐行掃描儀都具有光檢測(cè)系統(tǒng),它們都是將光量線性轉(zhuǎn)化為電信號(hào)的元件。不同的是,照相機(jī)和逐行掃描儀可進(jìn)一步將電信號(hào)轉(zhuǎn)換成電腦圖像,圖像中單個(gè)點(diǎn)(像素)的顏色深淺反映了光的強(qiáng)弱。
因此,薄層數(shù)碼成像更接近人眼觀察檢測(cè),結(jié)果更直觀,因此非常適合鑒別,特別是中藥指紋圖譜的識(shí)別。
數(shù)碼成像儀不僅能完成普通白光照射下的成像分析,再裝配254nm或365nm紫外燈后,也可以檢測(cè)特異熒光,特異熒光檢測(cè)。